Transformation , Colony PCR 생물공학실험 보고서

Ⅰ. 11주차 예비보고서 (Transformation)

11주차 예비보고서에서는 대장균에서의 형질전환(Transformation) 실험을 다룬다. 형질전환은 외부에서 유래한 DNA를 세포에 도입하여 유전적 특성을 변화시키는 과정이다. 이 실험의 목적은 plasmid DNA를 대장균에 도입하여 형질전환 효율을 확인하고, 이후 PCR을 통해 형질전환이 성공적으로 이루어졌는지를 검증하는 것이다. 형질전환 과정은 일반적으로 두 가지 방법이 있다. 첫 번째는 열충격법으로, 이 방법에서는 미리 조작한 대장균 세포를 특정 조건하에 열충격하여 plasmid DNA가 세포 내로 들어갈 수 있도록 한다. 두 번째는 전기천공법으로, 전기장을 이용해 세포막에 일시적인 구멍을 생성하여 DNA가 세포 내로 유입되도록 유도한다. 본 실험에서는 일반적으로 사용되는 열충격법을 채택하였다. 형질전환을 위한 준비과정으로는 우선 대장균 세포를 배양하여 생장한 후, CaCl2 용액에 세포를 처리해 주었다. CaCl2는 세포막의 투과성을 높여 DNA가 세포 내로 쉽게 들어올 수 있도록 돕는다. 이후 plasmid DNA를 첨가하고, 일정 시간 동안 냉장 상태에서 반응시켰으며, 이때 DNA가 세포 내로 내재화될 수 있는 시간이…(생략)