[생화학] cDNA 제작

1. 실험 목적 및 원리

cDNA 제작 실험의 목적은 특정 mRNA의 정보를 기반으로 complementary DNA (cDNA)를 합성하는 것이다. 이 과정은 유전자 발현 분석, 유전자 클로닝, 유전자 기능 연구 등에서 중요한 역할을 한다. cDNA는 주로 역전사 효소를 이용하여 mRNA로부터 합성되며, 이 과정은 mRNA 분자가 유전자 발현의 결과물로 생성된 단백질의 정보를 제공하기 때문에 중요하다. 실험의 첫 번째 단계는 세포나 조직에서 특정 mRNA를 추출하는 것이다. 이때, 이온 강도가 낮거나 유기 용매를 사용하지 않아 mRNA가 안정적으로 보존될 수 있는 방법이 필요하다. mRNA가 분리되면, 이를 역전사 효소와 함께 반응시켜 cDNA로 변환한다. 역전사 효소인 타불린(Taq polymerase)이나 M-MLV 역전사효소(Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase)는 RNA를 DNA로 역전사하는 데 필수적이다. 이 효소들은 RNA의 3` 말단에 primer가 결합할 때 작용하여 mRNA를 주형으로 사용하여 cDNA를 합성한다. 이때 사용되는 프라이머는 대개 poly-T 프라이머 또는 특정 유전자에 대한 오리진 프라이머가 사용되며, 이는 cDNA 합성의 특이성을 높이는 역할을 한다. cDNA 합성 과정이…(생략)