Animal cell culture, cell counting, and calculation of doubling time 실험 결과보고서

1. Cell counting과 Cell suspension 희석

10의 비율을 자주 사용한다. 먼저, 세포를 수확하기 위해 원심분리기에서 세포 배양액을 원심분리하여 침전물을 형성한다. 이 후 상층액을 조심스럽게 제거하고 침전된 세포를 PBS(Phosphate Buffered Saline) 또는 적절한 완충액으로 재현탁한다. 이 과정에서 세포가 손상되지 않도록 부드럽게 혼합하는 것이 중요하다. 현탁된 세포는 hemocytometer의 세포 카운팅을 위한 최적의 상태로 준비된다. 세포의 농도를 계산하기 위해, 세포 현탁액을 hemocytometer의 센서 부위에 떨어뜨리고 충분히 분산되도록 한다. 이후, 현미경을 사용하여 혈구 수를 세기 시작한다. 세포 수 세는 영역은 보통 각 섹션의 중앙 네모난 부분으로 정해져 있으며, 이 네모를 기준으로 세포를 카운트한다. 세포가 너무 겹쳐 보이지 않도록 고르게 분포해야 한다. 세포가 관찰된 영역의 총 세포 수를 기록한 후, 농도를 계산하기 위해 기준 부피로 환산한다. 세포의 농도는 다음과 같은 공식을 통해 계산된다. 세포 농도(세포/ml) = (세포 수 × 희석 배수) / (부피 값)이다. 10으로 희석했다면, 부피는 0. 1mm³이므로, 최종 세포 농도는 (50 × 10) / …(생략)