[연세대] 공학생물학및실험-Ni-NTA agarose 수지를 이용한 단백질 정제

1. 실험의 목적

이 실험의 목적은 Ni-NTA agarose 수지를 이용하여 히스티딘 태그가 부착된 재조합 단백질을 정제하는 것이다. 단백질 정제는 생화학 및 분자생물학 분야에서 중요한 과정으로, 특정 단백질을 분리하여 그 기능 및 특성을 연구하는 데 필수적이다. 특히, 히스티딘 태그는 재조합 단백질을 쉽게 정제할 수 있는 효과적인 방법으로 널리 사용된다. Ni-NTA agarose는 니켈 이온이 고정화된 아가로스 겔로, 히스티딘 잔기를 가진 단백질과 강하게 결합하는 성질을 가진다. 이를 통해 단백질 Purification 과정에서 높은 선택성과 수율을 기대할 수 있다. 실험에서는 먼저 히스티딘 태그가 부착된 단백질을 포함한 세포 추출물을 준비한다. 이후 Ni-NTA agarose 수지를 이용해 이 단백질을 결합시키고, 세척 과정을 통해 비특이적으로 결합된 불순물들을 제거한다. 마지막으로, 고농도의 히스티딘 용액 또는 pH 변화 등의 방법을 사용하여 결합된 단백질을 용출한다. 이 과정을 통해 원하는 단백질을 선택적으로 정제할 수 있으며, 정제된 단백질의 순도와 수량을 확인하여 실험의 성공 여부를 판단하게 된다. 또한, 이 실험은 단백질 정제의 원리를 이해하고, 실…(생략)