13주차 His-tagged protein purification

I.Purpose

His-tagged 단백질 정제의 목적은 특정 단백질을 효율적으로 분리하고 정제하여 연구에 활용하는 것이다. His-tag는 일반적으로 히스티딘 잔기를 포함하는 짧은 아미노산 서열로, 외부에 부착되어 있는 이 태그는 금속 이온과의 강한 상호작용을 통해 단백질을 분리하는 데 유용하다. 이러한 접근 방식은 여러 장점을 제공하는데, 먼저 His-tagged 단백질은 대장균이나 다른 발현 시스템에서 쉽게 발현 가능하다는 점이다. 이는 대량 배양이 용이하여 생산 비용을 절감할 수 있는 기회를 제공한다. 단백질 발현 후, His-tag를 포함한 단백질은 니켈(Ni²⁺)이나 코발트(Co²⁺) 이온으로 충전된 금속 친화 크로마토그래피 칼럼을 사용해 정제할 수 있다. 이렇게 함으로써, 태그가 붙은 단백질만이 선택적으로 칼럼에 결합하게 되고, 비부가 단백질이나 불순물들은 세척 과정에서 제거된다. 이후, 해당 단백질은 엘루션 단계에서 히스티딘과의 경쟁적 결합을 통해 쉽게 분리할 수 있다. 따라서 His-tagging 기술은 단백질의 고순도 정제와 함께 비교적 빠르고 효율적인 과정을 가능하게 하여 연구자들이 관심 있는 단백질의 기능 분석, 구조 연구, 그리…(생략)