[자연과학] [생화학실험] 단백질 정량 분석 - BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot

실험 일시:

1. 제목 : 단백질 정량 분석 BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot

2. 실험 목적

: BCA Method를 이용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고 SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜, 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단백질의 정량 분석과 검출하는 방법을 실험을 통해 숙지한다.

3. 이론

Ⅰ. 단백질 정량법

1) BCA(Bicinchoninic Acid) 법

- 단백질이 구리 이온(Cu2+, Cu1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용
Fig 1. BCA 원리 모식도
- 단백질에 의해 환원된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서 보라 빛의 화합물을 생성
- 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다.
- 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성 → 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수. 즉 흡수율이 증가 → 그것에 비례해서 Sample에…(생략)

2) Lowly assay(Folin-Ciocalteau)

3) Bradford assay