3.Methods
¨ç transformationµÈ E coli¸¦ kanamycin(100 ug/ml)ÀÌ Ã·°¡µÈ LB¹èÁö¿¡ Á¢Á¾
¨è ¼·¾¾ 37µµ¿¡¼¡¡ cultureÇÏ¿© Èí±¤µµ 600nm¿¡¼¡¡OD°ªÀÌ 0.6ÀÌ µÇµµ·Ï ¹è¾ç
¨é IPTG¸¦ ³óµµ°¡ 1mMÀÌ µÇµµ·Ï ÷°¡, ¹ßÇö À¯µµ
3½Ã°£ Induction½ÃŲ °Í (Á¶±³µéÀÌ ÁغñÇØÁÜ) / ½ÇÇè ½Ã°£¿¡ 1½Ã°£ induction½ÃŲ °Í
transformation¸¸ µÈ°Í, trnasformation¾ÈµÈ °Í
¨ê supernatant(»óÃþ¾×)À» ¹ö¸®°í pellet(ÇÏÃþ¿¡ ³²Àº µ¢¾î¸®)¸¸ ³²±ä ÈÄ sample buffer¸¦ 30§¡³Ö¾îÁØ´Ù.
¨ë water bath¿¡¼ 5ºÐ°£ boiling
¨ì pelletÀ» resuspension½ÃŲ´Ù.
¨í centrifugingÇÏ¿© pelletÀ» ¾ò´Â´Ù..
¨î loading
4.Result
transformationµÇÁö ¾ÊÀº °ÍÀº DNA ¹ßÇö Á¶Â÷ ºÒ°¡´É ÇÒ °ÍÀÌ´Ù.
inductionÀ» ÇÏÁö ¾ÊÀº °ÍÀº °ð, IPTG°¡ Æ÷ÇÔµÇÁö ¾Ê¾Ò´Ù´Â ÀǹÌÀÌ´Ù. IPTG°¡ Æ÷ÇÔµÇÁö ¾ÊÀ¸¸é
Àü»çµÇÁö ¾Ê°í À¯ÀüÀÚ ¹ßÇöÀÌ ÀϾÁö ¾Ê´Â´Ù. ±×·¯¹Ç·Î ¹ßÇöµÇÁö ¾Ê¾ÒÀ» °ÍÀÌ´Ù. inductionÀÇ ±â°£ÀÇ Á¶ÀýÇÑ °ÍÀ¸·Î º¸¾Æ ½Ã°£¿¡ µû¸¥ Â÷ÀÌ°¡ ÀÖ¾î¾ß ÇÒ °Í °°´Ù. Àü»çÈÄ ´Ü¹éÁúÀÇ »ý¼º Á¤µµ¡¦(»ý·«)
|