[일반생물학실험]Expression of recombinant -synuclein gene

1. 실험 방법

이 실험에서는 재조합 α-synuclein 유전자의 발현을 목표로 한다. 먼저, α-synuclein 유전자를 포함한 플라스미드 DNA를 준비한다. 이를 위해 해당 유전자를 클로닝할 벡터를 선택하고, 효율적인 발현을 위해 T7 프로모터가 포함된 상용 벡터인 pET 시리즈를 사용하는 것이 일반적이다. α-synuclein 유전자는 주로 E. coli에서 발현되므로, 발현할 숙주 세포주인 E. coli BL21(DE을 선택한다. E. coli 세포에 재조합 플라스미드를 도입하는 과정으로는 일단 셀 수율을 높이기 위해, E. coli BL21(DE 컬처를 LB 배지에서 배양하여 성장시킨다. 배양이 끝나면, 세포를 원심 분리하여 세포 침전물을 얻고, 이 과정을 통해 세포 내로 플라스미드를 형질전환하기 위해 CaCl2 또는 전기천공법(electroporation)과 같은 방법을 사용하여 플라스미드 DNA를 도입한다. 이후, 형질전환한 세포를 회복하기 위해 LB 배지에서 1~2시간 추가 배양하고, 적절한 선택 배지를 사용하여 항생제 저항성을 가진 세포만을 선별한다. 형질전환된 세포를 단독으로 배양하여 안정적인 클론을 얻은 후, 개별 클론의 발현 능력을 평가하기 위해 작은 스케일의 발현 실험을 수행한다. …(생략)