실험 예비레포트(western blot, nitrocellulose와 PVDF membrane 비교)

1. Western blot의 원리

Western blot은 단백질을 검출하고 분석하는 유용한 실험 기법이다. 이 방법은 특정 단백질의 존재와 양을 확인하기 위해 전기영동과 면역분석의 원리를 결합하여 사용한다. 기본적으로 샘플 내의 단백질을 분리하고, 그 후 특정 항체를 사용하여 검출하는 과정을 포함한다. 먼저, 샘플에 포함된 단백질은 SDS-PAGE라고 불리는 겔 전기영동을 통해 분리된다. SDS-PAGE에서 각 단백질은 SDS라는 비이온계 계면활성제에 의해 음전하를 띠게 되며, 이로 인해 단백질의 아위에 관계없이 크기로 분리된다. 그런 다음 전기장에 의해 겔을 통과하여 크기가 작은 단백질은 긴 경로를 지나고, 큰 단백질은 짧은 경로를 지나게 된다. 이 과정을 통해 샘플 내의 단백질들은 크기에 따라 정렬된다. 전기영동이 끝난 후, 분리된 단백질들은 겔에서 필터 메모리얼이 있는 전이 용기로 이동한다. 여기서 분리된 단백질을 nitrocellulose 또는 PVDF 막으로 전이시킨다. 이 전이 과정은 일반적으로 전기적 방법인 전기 전이(electroblotting)를 사용하여 이루어지며, 단백질들이 겔에서 막으로 이동하면서 실질적으로 고정된다. 전이 후, 단백질은 막 표면에 정렬되어…(생략)