[세포학실험] MTT assay

1. 실험방법

MTT assay는 세포 생존율 및 세포 증식률을 평가하는데 사용되는 광흡수 측정 기반의 방법이다. 이 실험의 기본 원리는 세포가 살아있을 때 그들의 미토콘드리아 효소가 노란색의 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)라는 화합물을 환원시키며, 이 과정을 통해 생성된 자주색 포마잔 결정을 통해 세포 수를 정량화하는 것이다. 실험은 일반적으로 세 가지 주요 단계로 진행된다. 첫 번째 단계는 세포 배양이다. 원하는 세포주를 준비하고, 세포가 적절하게 성장할 수 있도록 10% FBS, 1% 항생제가 포함된 배양 배지를 사용하여 37도에서 5% CO2 조건에서 배양한다. 세포가 적절한 밀도에 도달할 때까지 배양하고, 이 때 세포의 생존율을 확인하기 위해 트립신을 이용하여 세포를 수집하고 세포 밀도를 조절한다. 두 번째 단계는 MTT 처리 단계이다. 배양된 세포를 96웰 플레이트에 이전하고, 각 웰에 MTT 용액을 추가한다. MTT 용액의 농도는 일반적으로 0. 5mg/mL에서 2mg/mL 사이로 설정되며, 세포가 MTT를 효율적으로 환원할 수 있도록 적절한 농도를 사용해야 한다. MTT를 처리한 후에는 다시 3-4시간 정도 배양하여 세포…(생략)