[분자생물학실험]6X His tagged eGFP 단백질의 발현 및 정제와 단백질의 정량 및 정성적 특징 확인

1. 실험 이론 및 원리

6X His tagged eGFP 단백질의 발현 및 정제 실험은 재조합 단백질 생물학 연구에서 널리 사용되는 기법이다. 이 실험의 기본 원리는 특정 단백질을 대장균과 같은 호스트 세포에서 발현시키고, 발현된 단백질을 효율적으로 정제하여 그 특성을 분석하는 데 있다. eGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)는 원래 해파리에서 유래된 단백질로, 형광을 발산하는 특성 덕분에 생물학적 연구에서 중요하다. 그 구조는 다양한 생리학적 과정에서 단백질을 연구하는 데 유용한 도구가 된다. 6X His 태그는 히스팀(Histidine) 잔기가 연속적으로 6개 결합된 구조로, 이는 단백질 정제에서 유용하다. His 태그는 금속 이온과 강하게 결합하는 성질이 있어, 일반적으로 니켈(Ni²⁺)이나 코발트(Co²⁺) 이온을 포함하는 금속 친화 크로마토그래피(MAC) 방법을 통해 단백질을 정제하는 데 활용된다. 이 방식은 단백질의 순도와 수율을 높일 수 있어, 많은 연구자들이 널리 사용하는 방법이다. 단백질 발현의 첫 단계에서, 목적 단백질을 생성하기 위해 먼저 그 유전자가 대장균의 벡터에 클로닝된다. 이때 pET 벡터와 같은 발현 플라스미드를 사용…(생략)