2. PCRÀÇ ±¸¼º½Ã¾à°ú ¹ÝÀÀÁ¶°Ç
PCRÀº ¿ø¸®°¡ ´Ü¼øÇÏ°í Á¶ÀÛÀÌ °£ÆíÇÑ DNAÁõÆø¹ýÀ̸ç, »ç¿ëÇÏ´Â ½Ã¾àµµ ´Ü¼øÇÑ ÆíÀÌ´Ù. ±×·¯³ª ¹ÝÀÀÁ¶°ÇÀº º¹ÀâÇÏ¿© Á¶°ÇÀÇ ¼³Á¤ÀÌ ¾î·Æ´Ù.
1) ³»¿¼º DNA polymerase¿Í ¹ÝÀÀÁ¶°Ç
ÇöÀç °¡Àå ³Î¸® »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Â °ÍÀº Thermus aquaticus¶ó´Â ³»¿¼º ±Õ¿¡¼ ºÐ¸®µÈ Taq DNA polymeraseÀÌ´Ù. ÀÌ È¿¼Ò´Â pH 8.3 - 8.8, ¿Âµµ 70¡É-75¡É Á¤µµ¿¡¼ °¡Àå Àß ÀÛ¿ëÇϸç 94¡É ¿¡¼ 40ºÐ Á¤µµ À¯ÁöÇصµ 50%ÀÇ ÀÜÁ¸È°¼ºÀ» ³ªÅ¸³½´Ù. PCR¿¡¼´Â 1 - 2.5´ÜÀ§(unit)°¡ »ç¿ëµÈ´Ù. È°¼ºÀÇ ¹ßÇö¿¡´Â Mg2+°¡ ÇÊ¿äÇÏ°í, primer³ª deoxynucleotide°¡ È¿¼Ò¿¡ °áÇÕÇÒ ¶§ ÀÛ¿ëÇϸç, ±× ³óµµ´Â PCRÀÇ Æ¯À̼º¿¡ Å« ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ£´Ù. Åë»ó 0.5 - 2.5mmol/lÀÇ ³óµµ ¹üÀ§·Î »ç¿ëµÈ´Ù. deoxynucleotide triphosphate(dNTP)´Â 20 - 200 mmol/lÀÇ ³óµµ·Î »ç¿ëµÇÁö¸¸, ±× ÀÌ»óÀÇ °í³óµµ´Â Taq DNA polymerase°¡ DNA ¼¿À» À߸ø Àд ¿øÀÎÀÌ µÈ´Ù. Taq DNA polymerase´Â À߸ø µé¾î¿Â ¿°±â¸¦ ¿Ã¹Ù¸¥ ¹è¿·Î °íÄ¡´Â 3` - 5` exonuclease È°¼ºÀ» °¡ÁöÁö ¾Ê´Â´Ù. µû¶ó¼ ¹ÝÀÀÁ¶°Ç¿¡ ÀÇÇؼ Àбâ À߸øÀ» ÀÏÀ¸Å°´Â ºóµµ°¡ ³ô¾ÆÁö¸ç À߸øµÈ °á·Ð¿¡ µµ´ÞÇÒ ¿ì·Á°¡ ÀÖ´Ù. Åë»óÀÇ ¡¦(»ý·«)
|