3. Annealing
Single strand·Î Ç®¾îÁø templates¿¡ primer°¡ °¢°¢ÀÇ »óº¸ÀûÀÎ sequence¸¦ ã¾Æ¼ bidingÇÏ´Â °úÁ¤À¸·Î binding, annealing, hybridizationµî ´Ù¾çÇÑ ¿ë¾î·Î ºÎ¸¥´Ù. PCRÀÇ ÃÖÁ¾ÀûÀÎ sensitivity¿Í specificity¸¦ °áÁ¤ÇÏ´Â Á¦ÀÏ Áß¿äÇÑ °úÁ¤ÀÌ´Ù. Primer´Â templates °°Àº ±ä DNA¿Í´Â ´Þ¸® º¸Åë 15 bpsÀÌ»ó 30bpsÀÌÇÏÀÇ oligonucleotide¸¦ »ç¿ëÇϴµ¥ ÀÌ·± ªÀº DNAÀÇ hybridization temperature¸¦ °áÁ¤ÇÏ´Â µ¥¿¡´Â length, GC content, pH, salt concentrationµî ¿©·¯ ¿ä¼Ò°¡ ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ£´Ù. ÀÌ °úÁ¤¿¡¼ primer°¡ bidingÇÏ¿© free 3ꡑ end¸¦ Á¦°øÇÏ¸é ¿©±â¼ polymerase°¡ chain extensionÀ» ½ÃÀÛÇÑ´Ù. ½ÇÁ¦·Î´Â PCR¿¡ »ç¿ëÇÏ´Â Taq polymeraseÀÇ È°¼º ¿Âµµ ÀÌ»óÀÇ annealing temperature¸¦ °¡Áö´Â primer´Â »ç¿ëÇÒ ¼ö ¾ø´Ù.
4. Extension
Taq polymerase°¡ primerÀÇ 3ꡑendÀÇ free OH±â¸¦ ½ÃÀÛÁ¡À¸·Î Çؼ single strand templateÀÇ »óº¸ÀûÀÎ dNTP¸¦ °¡Á®¿Í¼ ºÙ¿© ³ª°¡¸ç chain extensionÀ» ½ÃÇàÇÑ´Ù. óÀ½ cycle¿¡¼´Â template¸¦ ±âÁØÀ¸·Î ÇÕ¼ºÀÌ µÇ¹Ç·Î target sequence¿Í´Â »ó°ü¾øÀÌ 3ꡑ¹æÇâÀ¸·Î 60 bps/secÀÇ ¡¦(»ý·«)
1. Final products of first cycle
2. Denaturation
|