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�쑀�쟾�옄 �옱議고빀 怨쇱젙�뿉 �궗�슜�릺�뒗 ligase�뒗 二쇰줈 DNA ligase�씠硫� �씠 �슚�냼�뒗 �썝�빑�꽭�룷, 吏꾪빑�꽭�룷, 諛붿씠�윭�뒪 �벑�뿉�꽌 �쑀�옒�븳 寃껋씠 �엳�뒗�뜲, �쁽�옱 留롮씠 �궗�슜�릺�뒗 ligase�뒗 T4 DNA ligase��� E. coli DNA ligase�씠�떎. T4 DNA ligase�뒗 cofactor濡� ATP瑜� �븘�슂濡� �븯怨�, E. coli ligase�뒗 NAD+瑜� �븘�슂濡� �븳�떎. �씠�뱾 �몢 ligase�뒗 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA�벑�뿉 紐⑤몢 �옉�슜�븷 �닔 �엳�쑝�굹 E. coli DNA ligase �뒗 T4 DNA ligase��� 鍮꾧탳�븷 �븣 blunt-ended DNA�뿉 �옉�슜�븯�뒗 �옒�씠 �빟�븯誘�濡� �씪諛섏쟻�씤 �쑀�쟾�옄 �옱議고빀 怨쇱젙�뿉�꽌�뒗 T4 DNA ligase瑜� �뜑 留롮씠 �궗�슜�븯�뒗 寃쏀뼢�씠 �엳�떎.
A. Cohesive end ligation
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1. �떎�뿕�뿉 �궗�슜�븷 vector��� insert瑜� 以�鍮꾪븳�떎. 臾쇰줎 vector��� insert�뒗 �걹�씠 媛숈�� 紐⑥뼇�쓣 �븯怨� �엳�뼱�빞 �븳�떎. 利� 媛숈�� �젣�븳�슚�냼�뿉 �쓽�빐 �젅�떒�릺�뼱 媛숈�� 議곌컖�쓣 �씠猷④퀬 �엳�뼱�빞 �븳�떎.
2. Vector��� insert�쓽 紐곕퉬(molar ratio)媛� 1:2瑜� �씠猷⑤룄濡� 誘몄꽭 �썝移④���뿉 �샎�빀�븯�뿬 �떞�뒗�떎.
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