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동물조직학 - 영구 조직표본 제작법
1. 고정(Fixation)
고정이란 세포의 기초물인 단백질, 지질, 탄수화물 등으로 구성된 생체를 고정액에 넣어 그 조직의 구조를 생체와 거의 같게 고정시키는 과정이다. 조직을 주사위 모양의 정육면체로 가정할 때 한 변의 길이가 5㎜~1㎝를 넘지 않도록 잘라 고정액에 담근다. 고정액은 단백질을 교차연결시키고 조직을 분해하는 효소를 불활성화시켜 세포구조를 보존해준다.
고정액으로는 주로 포르말린(37% 포름알데하이드의 등장완충액)을 사용한다. 포름알데하이드와 글루타르알데하이드는 조직단백질의 아민기와 반응하여 단백질 분자를 교차연결시켜 고정작용을 강화시킨다. 이외의 고정액으로는 부완액, 알코올 등이 있다.
2. 탈수(Dehydration)
침투과정에서 쓰이는 파라핀(paraffin)은 물과 융합되지 않기 때문에 조직에서 완전히 수분을 제거한 후가 아니면 침투시킬 수 없으므로 탈수 과정이 필요하다.
탈수과정은 70%에서 100%까지 순차적인 알코올 수용액 처리로 조직 내에 남아 있는 수분을 제거 하는 것이다.
a. 70% EtOH -1h
b. 80% EtOH -1h
c. 90% EtOH -1h
d. 95% EtOH -1h
e. 100% EtOH -1h
f. 100% EtOH -1h
g. 100% acetone -1h
h. 100% acetone -1h(overnight 가능)
3. 투명(Clearing)
용매가 조직에 침투하여 조직이 투명해 지는 과정이다. 탈수 후 알코올은 포매물질인 파라핀과 잘 융합되지 않으므로 자일렌(Xylene), 톨루엔(Toluene)과 같은 물질로 대치시켜준다.
4. 침투(Infiltration)
투명과정이 끝난 후 용매 속에 있던 조직은 실온에서 수지에 넣거나 오븐(52~60℃) 속의 파라핀 용액에 넣는다. 열에 의해 용매는 증발하며, 빈 공간은 파라핀으로 매워진다.
5. 포매(Embedding…(생략)
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