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목 차
■
서론
■
재료 및 방법
1 .
고체배지 제조(MRS Agar 200㎖ 제조)
2 .
고체배지에 균주 접종 (Streaking)
■
결과 및 고찰
■
주요 실험 기기
■ 서 론
앞으로 미생물들을 연구하기위해서는 배지에 미생물을 배양하는 것이 실험의 기초가 될 것이다. 그리고 그 베이스 위에 여러 미생물의 특성에 맞는 실험 방법 응응하여야 할 것이다,
미생물의 배양에 필요한 배지는 배양하고자 하는 미생물의 종류에 따라 그특성에 가장 적합한 것들을 선택하여 사용해야 하는데, 이는 단순히 미생물만 배양하는 것뿐 아니라, 집락의 형태와 특성, 생화학적 특성, 당 분해 성질, 유전적 특성, 배지의 선택, 구성 성분, 제조방법에 따라 미생물의 성패가 결정되기 때문이다. 그래서 이번 실험을 통하여 기본적인 미생물 배양을 익히고 그 방법을 숙지 하고자한다.
본 보고서는 MRS를 사용 만든 액상배지의 L. acidophilus을 고체배지를 직접 배양해 보고 배양 후 일정시간 후에 colony 형성 여부를 확인하여 평가하고자한다.
■ 재료 및 방법
1. 고체배지 제조(MRS Agar 200㎖ 제조)
(1)재료
MRS Broth, Agar powder, 증류수, 시약 스푼, 삼각 flask(250㎖), 마그네틱바, Hotplate and stirrer, 메스실린더, Autoclave(멸균기), Petri dish
(2)방법
① 손을 70% 알코올로 소독한 후 Cleanbench에 손을 넣는다.
② 250㎖ 삼각 flask(250㎖)에 MRS Broth 200㎖양인 11g와 Agar powder(1.5%) 200㎖ 양인 3g를 넣는다.
③ 증류수 200㎖을 메스실린더로 측정한다.
④ MRS Broth와 Agar powder가 든 삼각 flask에 증류수 200㎖를 넣는다.
⑤ 마그네틱 바를 비커에 넣고 Hotplate and stirrer를 사용하여 교반한다.
T…(생략)
⑥ 교반이 끝나면 Autoclave(멸균기)에 넣고 멸균을 한다.
⑦ 멸균을 마치고나면 충분히 식히고(약 45℃정도)MRS Agar를 clean bench에서 petri dish에 약 25㎖씩 담고 굳힌다.
① 손을 70% 알코올로 소독한 후 Cleanbench에 손을 넣는다.
② 백금이를 알코올램프를 이용하여 화염 멸균한다.
③ 멸균한 백금이를 접종할 고체배지에 시작점을 정하 여 식힌다.
④ 식힌 백금이로 접종할 균인 L. acidophilus를 살짝 찍어낸다.
⑤ 균을 묻힌 백금이로 시작점부분에 첫 번째 획선 배양한다.
⑥ 평판을 90° 돌린 후 첫 번째 획선 배양한 구획과 약간 중첩이 되도록 두 번째 구획에 획선 배양한다.
⑦ 다시 평판을 90° 돌린 후 두 번째 획선 배양한 구획과 약간 중첩이 되도록 세 번째 구획에 획선 배양한다.
⑧ 평판 뒷면에 균주 명과 필요한 기록을 한 후 미리 30℃로 setting된 Incubator에18~24시간 배양한다.
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선 배양한다.
⑧ 평판 뒷면에 균주 명과 필요한 기록을 한 후 미리 30℃로 setting된 Incubator에18~24시간 배양한다.
TIP Incubator는 사용전 미리 30℃로 setting로 세팅 시켜 놓아야 한다.
■ 결론 및 고찰
지난번 액체 배지를 만들 때 보다 좀 더 난이도가 필요한 실험이었다.
책으로만 보고 공부해 본 실험이었지만 실제로 해보고, 선배들에게 많이 물어봤다. 우리가 하는 실험은 쉬운 실험이지만 모든 미생물 실험에 있어서 기본이 된다고들 말한다. 그래서 기본을 잘 알아야 응용하기도 쉽다고들 한다 이번 실험을 통하여 많은 도움이 되었다고 생각한다, 앞으로 실험실에 들어가서 논문을 쓰기위해 어떠한 도움이라도 될 같다.
■ 주요 실험 기기
사 진
용 도
비 고
액체 물질을 마그네틱바를 이용하여 용해시킴
기기에 따라 Hiting기능도 있음.
Hotplate and stirrer
미생물에
의한 오염방지
사용 후
UV 램프 작동
사용 시
형광램프 작동
clean bench
고압고온 멸균
적정량의 물이 있는지 확인 후 사용
Autoclave
미생물배양
사용 전 온도 Setting
할 것
Incubator
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