½Ç½Àº¸°í¼
`´Ü¹éÁú Á¤·®¹ý`
¡Ý ¸ñÀû
Bradford method¸¦ ÅëÇØ ¹ÌÁö ½Ã·áÀÇ ´Ü¹éÁú ³óµµ¸¦ ¾Ë¾Æº¸°í ±× ¿ø¸®¸¦ ¾È´Ù.
¡Ý ÀÌ·Ð
ºê·¡µå ÆÛµå¹ý(Bradford method)
UV-Visible Spectrophotometer¸¦ ÀÌ¿ë, Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ¿© Ç¥ÁØ ¹°ÁúÀÎ BSA(Bovine Serum Albumin)³ª BGG(Bovine Gamma Globulin)¸¦ ±âÁØÀ¸·Î ÀÚ½ÅÀÇ ½Ã·á¿¡ ´Ü¹éÁúÀÌ ¾ó¸¶¸¸Å µé¾îÀÖ´ÂÁö ÃøÁ¤ÇÏ´Â ¹æ¹ýÁß ÇϳªÀÌ´Ù. ½Å¼ÓÇÏ°í °£ÆíÇÏ°Ô ´Ü¹éÁúÀ» Á¤·®ÇÒ ¼ö ÀÖ¾î ³Î¸® ¾²ÀδÙ. ¿°·á·Î´Â Coomassie Blue G-250À» »ç¿ëÇϸç, ÀÌ ¿°·á°¡ ´Ü¹éÁú°ú °áÇÕÇØ »ý±â´Â ÆÄÀåÀÇ º¯È¸¦ ÃøÁ¤ÇÑ´Ù.
ºê·¡µå ÆÛµå¹ýÀº ½Ç¿Â¿¡¼ »ç¿ë°¡´ÉÇϸç, ¾î´À Ưº°ÇÑ Àåºñ¸¦ ÇÊ¿ä·Î ÇÏÁö ¾Ê´Â´Ù. ¾î´À ´Ü¹éÁúÀÌµç µ¿ÀÏÇÑ ¿°·á¸¦ ´õÇØÁØ ÈÄ ¾à 5ºÐ Á¤µµ ¹ÝÀÀ½ÃÅ°°í, 595§¬¿¡¼ Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤Çϱ⸸ ÇÏ¸é µÇ´Â °£´ÜÇÑ ¹æ¹ýÀÌÁö¸¸ ´ë½Å Coomassie dye°¡ ¿°, detergent, Áö¹æ µî¿¡ ÀÇÇØ ½¬ÀÌ ¿µÇâÀ» ¹Þ´Â´Ù´Â ´ÜÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ƯÈ÷³ª Sample¿¡ °è¸é È°¼ºÁ¦°¡ Á¶±ÝÀÌ¶óµµ Á¸ÀçÇÏ´Â °æ¿ì, Á¤·® °ªÀÌ Å©°Ô ¿µÇâÀ» ¹Þ°Ô µÇ´Âµ¥, ÀÌ´Â ¿°·á·Î »ç¿ëÇÏ´Â Coomassie Blue°¡ acidicÇϱ⠶§¹®ÀÌ´Ù. ´Ü¹éÁú¿¡ µû¶ó¡¦(»ý·«)
BSA1)
PAB2)
¨ç BSA standard¸¦ ÁغñÇÑ´Ù.
1.49§·/§¢
¨è BSA¸¦ 1¹è, 2¹è, 4¹è, 8¹è Èñ¼®½ÃŲ °Í°ú PBS¸¦ Micro PipetÀ¸·Î 10§¶¾¿ µû¼ 96 well plate¿¡ 5¹ø° ĺÎÅÍ BSA 1.49§·/§¢ ¼¼·Î·Î ¼¼ ÁÙ, 1.49/2¸¦ ¼¼·Î·Î ¼¼ ÁÙ ÀÌ·± ½ÄÀ¸·Î ¼ø¼´ë·Î ´ã´Â´Ù. ÃÑ 15ÄÀ» ä¿î´Ù. (¡Ø Micro Pipet »ç¿ë ½Ã ÇÑ ¹ø »ç¿ëÇÑ TipÀº ¹ö¸®°í »õ·Î¿î TipÀ» »ç¿ëÇÑ´Ù.)
¨é ½Ç¿Â¿¡¼ 5ºÐ°£ ¹è¾çÇÑ´Ù.
¨ê ÄÄÇ»ÅÍ¿Í UV-Visible spectrophotometerÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÑ´Ù. Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÒ¶§´Â 595§¬¿¡¼ ÃøÁ¤À» ÇØ¾ß ³ª¿Â´Ù. °á°ú°¡ ³ª¿À¸é ¿¢¼¿ÀÇ ÇÔ¼ö½Ä average¸¦ ÀÌ¿ëÇØ Æò±ÕÀ» ±¸ÇÑ´Ù. ÀÌ µ¥ÀÌÅ͵éÀ» Â÷Æ®·Î ¸¸µé¸é ½ÇÇè°á°ú°¡ ³ª¿Â´Ù.
¨ë ±¸ÇÑ Â÷Æ®ÀÇ ÇÔ¼ö½ÄÀ» ±¸ÇÏ°í R©÷ÀÇ °ªÀÌ 1¿¡ °¡±î¿îÁö È®ÀÎÇÑ´Ù.
|
0.6615
0.8225
1.2872
Æò±Õ
0.3495
0.529267
0.680333
0.908733
1.2486
Æò±Õ°ªÀ¸·Î Â÷Æ®¸¦ ¸¸µç´Ù. (ÀÌ ¶§ ¿¢¼¿À» ÀÌ¿ëÇϸé Æí¸®ÇÏ°Ô ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.)
BSA standardÀÇ °¢ ³óµµ¿¡ µû¸¥ Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ°í, Æò±ÕÀ» ³»¾î Ç¥ÁØ°î¼±À» ±×¸®°í, ±× ½ÄÀ» ã¾Ò´õ´Ï y=0.5858x+0.416ÀÌ¿´°í, R©÷=0.9767·Î ³ª¿Ô´Ù.
¡Ý ½ÇÇè ¼Ò°¨
óÀ½¿¡ ±³¼ö´Ô ²²¼ UV-Visible Spectrophotometer¿¡ ´ëÇؼ ¼³¸íÇÏ½Ç ¶§ ±²ÀåÈ÷ ¾î·Á¿ö º¸¿´´Âµ¥ ¸·»ó ÇÏ´Ï±î ½ÇÇè ³»¿ëµµ ±²ÀåÈ÷ Èï¹Ì·Î¿ü°í, °íµîÇлý ¶§ ¹è¿ü´ø ºä·¿¹ÝÀÀÀÌ »ý°¢³ª¼ ÀÌÇØÇϱ⠽¬¿öÁ³´Ù. óÀ½ Á¢Çغ¸´Â Micro PipetÀÇ »ç¿ë¹ý¿¡ ´ëÇØ ¾Ë°Ô µÇ°í, TipÀ» ¸Å¹ø °¥¾ÆÁÖ¾î¾ß ÇÑ´Ù´Â Áß¿äÇÑ »ç½ÇÀ» ¾Ë°Ô µÇ¾ú´Ù. ¿À´Ã ½ÇÇèÀº ³ª¿¡°Ô ¸¹Àº°É ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Â º¸¶÷ ÀÖ´Â °æÇèÀÌ µÇ¾ú´Ù.
¡Ý Âü°í¹®Çå ¹× Âü°íÀÚ·á
°¿µÈñ, ¡º»ý¸í°úÇдë»çÀü¡», ¾ÆÄ«µ¥¹Ì¼Àû, 2008.
Çѱ¹»ýÈÇÐȸ, ¡º½ÇÇè»ýÈÇС», Ž±¸´ç, 2004.
°¢ÁÖ)-
Bovine Serum albumin : Ç÷û¿¡ ³ì¾ÆÀÖ´Â ´Ü¹éÁúÀÇ ÇÑ Á¾·ù
°ËÃâ½Ã¾à : ´Ü¹éÁúÀ» ³ÖÀ¸¸é º¯ÇÔ
°¢ÁÖ)-