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plasmid DNA 추출 보고서

등록일 : 2013-04-29
갱신일 : 2013-04-29


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plasmid DNA 추출 보고서
plasmid DNA 추출

1. 서론

분자생물학의 도움으로 생물체 내의 여러 가지 생화학적 반응의 조절과 질병의 치료에 대한 이해가 분자적 수준에서 이루어지고 있다. DNA의 생물체 내에서의 이러한 작용이 밝혀짐에 따라 그 중요성이 더욱 부각되었고, 이 DNA를 연구하는 분자생물학은 좀 더 나은 결과를 위해서 함께 발전해 왔다. 예컨대, 인슐린의 대량생산을 위한 Escherichia Coli 의 cloning vector로의 활용은 대단히 많은 당뇨병 환자들을 도왔으며, 유전자의 발현 기작까지도 이 분자생물학의 발달에 의해서 가능하게 되었다. 우리는 분자생물학을 이해하기 위해 DNA를 다루는 기본적인 기술들을 이번 실험에서 익혔다. Escherichia Coli 와 Pseudomonas Fluorescence의 chromosomal DNA를 추출하고, E.Coli 의 Plasmid를 추출해서 제한효소 처리를 통해 plasmid 상태를 확인함으로써 DNA를 다루는 방법을 익혔다.

Chromosomal DNA Extraction
세균으로부터 DNA를 추출하는 방법이다. 세균에 SDS(세제)를 가하고 온도를 높이면 세균의 세포벽에 붙어 있던 인지질이 용해되어 DNA를 세포로부터 해리시킨다. DNA용액에 에탄올을 가하면 DNA는 알코올에 대해 불용성이므로 용액 속에 하얀 실처럼 보이는 DNA가 나타난다.

Restriction Enzyme
DNA는 효소를 이용해서 자르고 붙일 수 있는데, 이 때 DNA의 특정 sequence 인식하여 자르는 효소를 제한효소라 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restrict…(생략)

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